期刊信息
主办:中国中医科学院中药研究所;中华中医药学会
主管:国家中医药管理局
ISSN:1005-9903
CN:11-3495/R
语言:中文
周期:半月
影响因子:1.817375
数据库收录:
北大核心期刊(2008版);北大核心期刊(2011版);北大核心期刊(2014版);北大核心期刊(2017版);化学文摘(网络版);中国科学引文数据库(2015-2016);中国科学引文数据库(2017-2018);中国科学引文数据库(2019-2020);日本科学技术振兴机构数据库;中国科技核心期刊;期刊分类:中药学
期刊热词:
药理
淫羊藿苷通过提高自噬促进成骨细胞分化防治骨(3)
【作者】网站采编
【关键词】
【摘要】动物造模目的、技术方法等相关问题造模目的: 观察淫羊藿苷对骨质疏松大鼠股骨自噬相关蛋白ULK1、FIP200、ATG13 表达的影响借鉴已有标准动物模型造模:
动物造模目的、技术方法等相关问题造模目的: 观察淫羊藿苷对骨质疏松大鼠股骨自噬相关蛋白ULK1、FIP200、ATG13 表达的影响借鉴已有标准动物模型造模:参考文献[15]建立骨质疏松大鼠模型选择动物的条件: 大鼠骨代谢与人类相似,造模因素比较单一,实验结果相对准确,重复性较好模型与所研究疾病的关系: 该模型能较好地复制骨质疏松的发病过程动物来源及品系: 雌性SD 大鼠,6 月龄,体质量200-300 g,由广州中医药大学实验动物中心提供,实验动物质量合格证明编号:NO.44造模技术描述: 切除大鼠双侧卵巢动物数量及分组方法: 24 只大鼠随机分组:假手术组、病理模型组、淫羊藿苷组、雌二醇组,n=6造模成功评价指标: 病理模型组右侧股骨测量,骨密度值较假手术组明显下降为造模成功造模后实验观察指标: ①骨显微参数;②自噬相关蛋白表达伦理委员会批准: 动物实验方案经广州中医药大学实验动物中心动物实验伦理委员会批准,批准号:2
(3)Micro-CT 检测:药物干预12 周后,麻醉后处死所有大鼠,取大鼠右侧股骨置于40 g/L 的多聚甲醛中固定2 d 后更换为体积分数75%的乙醇浸泡,在扫描前1 d 更换为生理盐水浸泡。扫描时,将股骨放在Micro-CT 线圈中,从股骨远端开始进行CT 螺旋扫描,每18 μm 作为一个断层,将所有标本以股骨远端生长板顶点往上除去50 张,再开始往上取100 张去掉皮质为兴趣区域,自带软件分别测定骨密度、骨小梁数量(trabecular number,Tb.N)、骨小梁厚度(trabecular thickness,Tb.Th)、相对骨体积(bone volume/tissue volume,BV/TV)、骨小梁间距(trabecular separation,Tb.Sp)等指标。
(4)Western-Blotting:取大鼠的左侧股骨进行检测,余步骤同“1.4.2 中(3)”。
1.5 主要观察指标 ①细胞活力;②ALP 活性;③茜素红染色结果;④凋亡率;⑤MDC 染色结果;⑥成骨分化及自噬相关基因、蛋白的表达;⑦骨骼显微参数。
1.6 统计学分析 采用SPSS 19.0 软件进行统计学分析,计量数据用±s表示,若数据呈正态分布且方差齐,采用单因素方差分析,进一步多重比较采用LSD 法,P< 0.05 为差异有显著性意义。
2 结果 Results
2.1 淫羊藿苷的最佳浓度是10-5mmol/L
2.1.1 不同浓度淫羊藿苷对细胞活力的影响 与对照组同期比较,24 h 后,10-5,10-6mmol/L 淫羊藿苷组细胞活力增高(P< 0.05);48 h 后,10-4,10-5mmol/L 淫羊藿苷组细胞活力增高(P< 0.05);72 h 后,10-4,10-5,10-6mmol/L 淫羊藿苷组细胞活力增高,提示10-5mmol/L 浓度下的淫羊藿苷更能促进成骨细胞的增殖,见图1。
2.1.2 不同浓度淫羊藿苷对ALP 染色的影响 干预7 d 后,与对照组比较,10-3-10-6mmol/L 淫羊藿苷组ALP 染色深度加强,其中以10-4,10-5mmol/L 更加明显,见图2。
2.1.3 不同浓度淫羊藿苷对ALP 活性的影响 与对照组同期比较,1 d 后,10-5mmol/L 淫羊藿苷组ALP 活性增高(P< 0.05);3 d 后,10-3mmol/L 淫羊藿苷组ALP 活性降低(P< 0.05),10-4,10-5mmol/L 淫羊藿苷组ALP 活性增高(P< 0.05);5 d 后,仅10-5mmol/L 淫羊藿苷组的ALP 活性可见增高(P< 0.05);7 d 后,10-4,10-5mmol/L 淫羊藿苷组ALP 活性增高(P< 0.05),提示10-5mmol/L浓度下的淫羊藿苷更能促进ALP活性,见图3。
2.1.4 不同浓度淫羊藿苷对矿化结节形成的影响 干预21 d后,与对照组比较,10-3-10-6mmol/L 淫羊藿苷组矿化结节的数量可见增多,其中以10-4,10-5mmol/L 淫羊藿苷组更加显著,提示该浓度下的淫羊藿苷更能促进矿化结节的形成,见图4。
2.1.5 不同浓度淫羊藿苷对细胞凋亡的影响 干预48 h 后,对照组的凋亡率为35.3%,10-3mmol/L 淫羊藿苷组的凋亡率为25%,10-4mmol/L 淫羊藿苷组的凋亡率为14.1%,10-5mmol/L 淫羊藿苷组的凋亡率为11.8%,10-6mmol/L 淫羊藿苷组的凋亡率为12.4%,提示10-5mmol/L 淫羊藿苷更能抑制成骨细胞的凋亡,见图5。
2.1.6 不同浓度淫羊藿苷对成骨分化标志物的影响 干预7 d后,与对照组比较,10-4,10-5,10-6mmol/L 淫羊藿苷组OCN、Runx2、Osterix、OPG mRNA 的表达水平增高(P< 0.05);10-3mmol/L 淫羊藿苷组Runx2、OPG mRNA 的表达增高(P<0.05),提示淫羊藿苷能够上调成骨分化标志物的表达且以10-5mmol/L 效应最佳,见图6。
2.2 淫羊藿苷通过提高自噬促进成骨细胞分化
2.2.1 MDC 检测淫羊藿苷对细胞自噬的影响 采用前面实验所得最佳浓度淫羊藿苷(10-5mmol/L)干预48 h 后,与对照组比较,淫羊藿苷组自噬小体的数量增多;与淫羊藿苷组相比,淫羊藿苷+3-MA 组自噬小体的数量减少,提示淫羊藿苷能够提高细胞的自噬水平,见图7。
文章来源:《中国实验方剂学杂志》 网址: http://www.zgsyfjxzzzz.cn/qikandaodu/2021/0128/402.html