期刊信息
主办:中国中医科学院中药研究所;中华中医药学会
主管:国家中医药管理局
ISSN:1005-9903
CN:11-3495/R
语言:中文
周期:半月
影响因子:1.817375
数据库收录:
北大核心期刊(2008版);北大核心期刊(2011版);北大核心期刊(2014版);北大核心期刊(2017版);化学文摘(网络版);中国科学引文数据库(2015-2016);中国科学引文数据库(2017-2018);中国科学引文数据库(2019-2020);日本科学技术振兴机构数据库;中国科技核心期刊;期刊分类:中药学
期刊热词:
药理
有氧运动训练周可改善肥胖介导大鼠肠系膜动脉(2)
【作者】网站采编
【关键词】
【摘要】组织工程实验动物造模过程的相关问题造模目的: 建立肥胖大鼠有氧运动训练模型,探究有氧运动对肥胖诱导的血管平滑肌钾通道的作用选择动物的基本
组织工程实验动物造模过程的相关问题造模目的: 建立肥胖大鼠有氧运动训练模型,探究有氧运动对肥胖诱导的血管平滑肌钾通道的作用选择动物的基本资料:①SD 大鼠60 只;②8 周龄;③体质量(214.) g;④雄性模型与所研究疾病的关系:肥胖可诱导血管平滑肌钾通道表达和功能的改变造模技术描述:45%高脂饲料饲养8 周动物数量及分组方法:肥胖大鼠和正常大鼠分别随机分为安静对照组与有氧运动组,即正常安静组、正常运动组、肥胖安静组和肥胖运动组,每组10 只造模成功评价指标:以大鼠体质量比普通饲料组平均增加10%且Lee’s 指数比普通饲料组增加1.5%作为肥胖大鼠的标准;运动组大鼠进行8 周跑台运动造模后取材及观察指标:麻醉后腹主动脉取血处死。观察指标:①各组大鼠血糖血脂水平;②各组大鼠肠系膜动脉对KCl、Kv 通道特异性阻断剂4-氨基吡啶和BKCa 通道特异性阻断剂北非蝎毒素的反应性;③各组大鼠肠系膜动脉Kv1.2、Kv1.5、BKCa α 和BKCa β1 蛋白表达伦理委员会批准:该实验经过江苏师范大学动物实验伦理委员会批准,批准号为
1.4.2 取材 所有动物在最后一次运动后48 h 空腹取材。采用腹腔注射5%水合氯醛(10 mL/kg)麻醉,取静脉血用于血糖和血脂测试。取肠系膜动脉,置于Na+-Hepes 缓冲液中(NaCl 121.1 mmol/L、Hepes 10 mmol/L、KCl 5.16 mmol/L、MgSO42.4 mmol/L、Glucose 11.08 mmol/L,CaCl21.6 mmol/L,NaOH调pH 值到7.4),去除血管周围脂肪组织,避免牵拉血管,一部分0 级血管用于血管张力测试,另一部分置于液氮速冻,用于蛋白表达的检测。
1.4.3 血糖和血脂测试 取静脉血,在4 ℃环境下5 000 r/min 离心5 min,提取上清。将上清液送至徐州市铜山区中医院检测血糖和血脂。
1.4.4 离体血管环及血管张力测试 将分离得到的肠系膜动脉制成4 mm 左右的血管环,用平头针头来回穿插几次以去除内皮,先将血管环穿过固定支架铁丝,再将三角挂钩穿过血管环,利用手术线连于张力换能器。先调节血管张力使其维持在1 g左右,平衡1 h,待张力稳定后给予120 mmol/L KCl 刺激血管收缩,记录其收缩幅度作为最大收缩能力(Kmax),然后利用乙酰胆碱检测内皮完整性。洗去KCl 和乙酰胆碱,待张力稳定后分别加入4-氨基吡啶(5×10-3mol/L)和北非蝎毒素(3×10-8mol/L),记录各组大鼠血管张力及对阻断剂的反应性变化。
1.4.5 Western blot 方法检测相关蛋白表达 待肠系膜动脉去除血管周围脂肪组织后,置于液氮中迅速冷却待用。各组动脉组织分别在液氮中研磨粉碎,加入裂解液,4 ℃环境12 000 ×g离心30 min,提取蛋白上清液。BCA法测定蛋白浓度,采用SDS-PAGE 电泳对各分子里样品蛋白进行分离,然后转膜至PVDF 膜,BSA 孵育封闭,然后加入Kv1.2、Kv1.5、BKCaα和BKCaβ1 不同抗体,4 ℃孵育过夜,第2 天加入相应二抗,TBST 漂洗,配制ECL 发光试剂反应液,放入Bio-Rad 凝胶成像仪中进行拍摄得到目的条带图像。用 Image Lab 软件读取条带的积分灰度值,以β-actin 为内参,各组目的蛋白的表达=(目的蛋白灰度值/内参蛋白灰度值)∶(对照目的蛋白灰度值/内参蛋白灰度值)。
1.5 主要观察指标 ①各组大鼠血糖、血脂水平;②各组大鼠肠系膜动脉对KCl、Kv 通道特异性阻断剂4-氨基吡啶和BKCa通道特异性阻断剂北非蝎毒素的反应性;③各组大鼠肠系膜动脉Kv1.2、Kv1.5、BKCaα 和BKCaβ1 蛋白表达。
1.6 统计学分析 应用SPSS 19.0 对实验数据进行分析,实验结果以平均值±标准误形式表示。所有实验结果经检验符合正态分布,组间采用双因素方差分析法( ANOVA)检验交互作用,如果无主效应,同种干预方式或同种模型组间采用独立样本t检验,P< 0.05 为差异有显著性意义,P< 0.01 为差异有非常显著性意义。
2 结果 Results
2.1 实验动物数量分析 实验开始采用60 只大鼠用于构建模型,筛选得到20 只肥胖大鼠,有20 只未达到肥胖标准被舍去,最终共有40 只大鼠进入结果分析,中途无脱落。
2.2 各组大鼠体质量、空腹血糖和血脂水平 在运动干预前,肥胖大鼠体质量显著高于普通大鼠(P< 0.05),而同一模型中的运动组与安静组间差异无显著性意义(P> 0.05)。如表1 所示,肥胖安静组体质量、心脏质量、空腹血糖、三酰甘油、低密度脂蛋白和总胆固醇水平非常显著高于正常安静组(P<0.01),而与正常安静组相比,正常运动组三酰甘油和低密度脂蛋白水平非常显著降低(P< 0.01);肥胖运动组体质量、心脏质量、空腹血糖、三酰甘油和低密度脂蛋白水平较肥胖安静组非常显著降低(P< 0.01)。
文章来源:《中国实验方剂学杂志》 网址: http://www.zgsyfjxzzzz.cn/qikandaodu/2021/0302/482.html