期刊信息
主办:中国中医科学院中药研究所;中华中医药学会
主管:国家中医药管理局
ISSN:1005-9903
CN:11-3495/R
语言:中文
周期:半月
影响因子:1.817375
数据库收录:
北大核心期刊(2008版);北大核心期刊(2011版);北大核心期刊(2014版);北大核心期刊(2017版);化学文摘(网络版);中国科学引文数据库(2015-2016);中国科学引文数据库(2017-2018);中国科学引文数据库(2019-2020);日本科学技术振兴机构数据库;中国科技核心期刊;期刊分类:中药学
期刊热词:
药理
通络止痛凝胶干预膝关节骨性关节炎模型兔的软(2)
【作者】网站采编
【关键词】
【摘要】1.5 主要观察指标 1.5.1 家兔右膝关节直径变化及软骨损伤情况 各组家兔均在造模前以及造模后相应时间点以及干预3 周后使用游标卡尺测量右膝关节直径长
1.5 主要观察指标
1.5.1 家兔右膝关节直径变化及软骨损伤情况 各组家兔均在造模前以及造模后相应时间点以及干预3 周后使用游标卡尺测量右膝关节直径长度,观察患膝关节肿胀程度变化。制备软骨组织病理切片,进行苏木精-伊红染色,置于光镜下观察软骨组织损伤情况。
1.5.2 RT-qPCR 检测软骨组织中白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α、基质金属蛋白酶13 及解聚蛋白样金属蛋白酶5 的mRNA 水平变化 各组均取10 mg 软骨组织,使用Trizol 法提取软骨组织中的mRNA,采用分光光度仪检测各组mRNA 浓度。根据反转录试剂盒说明书将mRNA 反转录为cDNA,加入目标基因的上下游引物及mix 荧光染料后上机检测各组白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α、基质金属蛋白酶13 及解聚蛋白样金属蛋白酶5 的mRNA 表达水平。引物见表1。
表1 |实验所需引物列表Table 1 |List of primers required for the study基因名称 引物序列 碱基数白细胞介素1β 上游:CCG TGG ACC TTC CAG GAT GA 上游:20 bp下游:GGG AAC GTC ACA CAC CAG CA 下游:20 bp肿瘤坏死因子α 上游:CAT CTT CTC AAA ATT CGA GTG ACA A 上游:25 bp下游:TGG GAG TAG ACA AGG TAC AAC CC 下游:23 bp基质金属蛋白酶13 上游:TGC AGA GAG CTA CCT GAG AT 上游:20 bp下游:ACT GCA TTT CTC GGA GCC TG 下游:20 bp解聚蛋白样金属蛋白酶5 上游:TGG GCT ACT CAG CCA CAA AG 上游:20 bp下游:CCA CTG CAG CTG TGA CGT AT 下游:20 bp β-Actin 上游:GCA TCC CCA AAG TCC CCA AA 上游:20 bp下游:GTC ACA TGG CAT CTC ACG AT 下游:20 bp
1.5.3 Western blot 检测软骨组织中白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α、基质金属蛋白酶13 及解聚蛋白样金属蛋白酶5的蛋白水平变化 取10 mg 软骨组织,剪碎后加入200 μL的RIPA 和PMSF 混合液,使用匀浆机匀浆后于4 ℃下静置20 min,12 000 r/min 离 心15 min,取180 μL 上 清 并 进 行BCA 蛋白浓度测定,随后加入PBS 使各组蛋白浓度一致,再加入1/4 体积的上样缓冲液,混匀后于95 ℃金属浴5 min,放于-80 ℃保存。根据目标分子质量大小配置浓度为8%-12%的分离胶,每组加入10 μL 样品进行电泳,随后进行电转将蛋白转至PVDF 膜,5%脱脂奶粉封闭1 h 后加入适当浓度白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α、基质金属蛋白酶13 以及解聚蛋白样金属蛋白酶5 一抗4 ℃孵育过夜,TBST 清洗后加入相应二抗,室温孵育1 h 后加入ECL 显影。
1.6 统计学分析 所有数据均采用±s表示,使用SPSS 22.0软件进行统计分析。组间比较时先进行正态分布检验,再进行方差齐性检验。符合正态分布且方差齐性使用非配对t检验;符合正态分布但不符合方差齐性使用welch’s 校正非配对t检验;非正态分布使用Mann-Whitney 秩和检验,P< 0.05为差异有显著性意义。
2 结果 Results
2.1 家兔一般情况 在实验中,中度KOA 模型组和通络止痛凝胶干预重度KOA 组各有1 只家兔因麻醉过量死亡,假手术组和通络止痛凝胶干预轻度KOA 组在日常喂养中因消化道不良反应死亡1 只,其余家兔未见明显异常。各组家兔在术后均未出现感染,皮肤愈合良好,通络止痛凝胶干预轻、中、重度KOA 组在予以通络止痛凝胶外敷时,均未见有皮肤红肿等不良反应。
2.2 家兔右膝关节直径变化 与造模前相比,改良Hulth 法造模家兔在4 周后右膝关节直径显著增加,差异有显著性意义(P< 0.05);8 周和16 周关节直径继续增大,与造模前比差距更为显著(P< 0.01)。在予以通络止痛凝胶外用治疗3 周后,通络止痛凝胶干预轻、中度KOA 组右膝关节直径显著降低(P< 0.01),通络止痛凝胶干预重度KOA 组直径亦明显降低(P< 0.05),但没有其他2 组显著,见表2。
表2 |各组家兔不同时间点下右膝关节直径变化 (±s,mm)Table 2 |Changes of right knee joint diameter in rabbits at different time points表注:与造模前相比,aP< 0.05,bP< 0.01;与造模4 周或8 周或16 周后相比,cP<0.05,dP< 0.01。KOA:膝关节骨性关节炎组别 n 造模前 4 周 8 周 16 周 干预3 周后空白对照组 7 18. 18. 18. - -假手术组 6 18. 18. 19. - -轻度KOA 模型组7 18. 19. - - -中度KOA 模型组6 18. - 20. - -重度KOA 模型组7 18. - - 22. -通络止痛凝胶干预轻度KOA 组6 18. 19. - - 19.通络止痛凝胶干预中度KOA 组7 18. - 20. - 19.通络止痛凝胶干预重度KOA 组6 18. - - 22. 21.
2.3 各组家兔软骨损伤情况 正常软骨组织结构完整,各层排列整齐,软骨面平整、光滑,软骨基质着色均一,潮线清晰,未见软骨细胞簇集,无血管翳生成,见图1A;假手术组与空白对照组未见明显区别,软骨面完整,见图1B;轻、中及重度KOA 模型组软骨组织均可见不同程度软骨损伤,随造模时间延长而逐渐加重,轻度KOA 模型组软骨表面粗糙,细胞排列紊乱,可见部分软骨细胞簇集,见图1C;中度KOA模型组软骨表层和移行层出现分层,软骨细胞簇集增多,血管翳增生,见图1D;重度KOA 模型组软骨损伤进一步加重,出现大量剥脱,软骨陷凹形成,见图1E。通络止痛凝胶干预轻、中度KOA 模型组均有明显减轻,软骨较平整,通络止痛凝胶干预中度KOA 组仍可见部分软骨细胞簇集,见图1F,G;通络止痛凝胶干预重度KOA 模型组软骨损伤减轻,剥脱减少,但仍可见软骨出现分层及大量细胞簇集,见图1H。
文章来源:《中国实验方剂学杂志》 网址: http://www.zgsyfjxzzzz.cn/qikandaodu/2021/0128/404.html