期刊信息
主办:中国中医科学院中药研究所;中华中医药学会
主管:国家中医药管理局
ISSN:1005-9903
CN:11-3495/R
语言:中文
周期:半月
影响因子:1.817375
数据库收录:
北大核心期刊(2008版);北大核心期刊(2011版);北大核心期刊(2014版);北大核心期刊(2017版);化学文摘(网络版);中国科学引文数据库(2015-2016);中国科学引文数据库(2017-2018);中国科学引文数据库(2019-2020);日本科学技术振兴机构数据库;中国科技核心期刊;期刊分类:中药学
期刊热词:
药理
透骨消痛胶囊干预早期骨关节炎滑膜水肿模型大(2)
【作者】网站采编
【关键词】
【摘要】1.4.3 小动物核磁共振成像观察膝关节形态结构 造模成功后,大鼠取材前进行小动物核磁共振成像分析。动物吸入异氟烷麻醉,取仰卧位,左膝伸直固定,
1.4.3 小动物核磁共振成像观察膝关节形态结构 造模成功后,大鼠取材前进行小动物核磁共振成像分析。动物吸入异氟烷麻醉,取仰卧位,左膝伸直固定,表面线圈固定于关节正上方,中心正对胫骨平台,采用冠状位T2WI 和矢状面T2WI 进行成像。
1.4.4 放射免疫法测定血清和关节液白细胞介素1β 和肿瘤坏死因子α 水平 将血清和关节液自然解冻,恢复至室温。白细胞介素1β 水平的测定按碘[125I]白细胞介素1β 放射免疫分析药盒说明书进行操作;肿瘤坏死因子α 水平的测定按肿瘤坏死因子放射免疫分析药盒按说明书进行操作。
1.4.5 光镜观察滑膜组织石蜡切片 关节滑膜常规石蜡包埋,切片4 μm,苏木精、伊红染色,光镜下观察并采集图像。
1.4.6 透射电镜观察滑膜超薄切片 滑膜组织用锇酸后固定,乙醇-丙酮脱水,环氧树脂618 包埋;半薄切片定位、辅助观察,超薄切片90 nm,醋酸铀、柠檬酸铅染色;透射电镜观察滑膜细胞超微结构并拍照。
1.4.7 免疫组化/荧光染色定量、定位水通道蛋白表达 石蜡切片4 μm,柠檬酸修复液高温修复,体积分数3% H2O2、10%山羊血清孵育后,一抗(1 ∶600 水通道蛋白1 或1 ∶100水通道蛋白3 的兔抗大鼠多克隆抗体) 4 ℃孵育过夜,生物素标记羊抗兔二抗孵育20 min,辣根过氧化物酶标记的链霉菌抗生物素孵育,DAB 染色、苏木素复染。显微图像定量分析(Motic Med 6.0,麦克奥迪公司) 水通道蛋白1 和水通道蛋白3 阳性表达面积。
免疫荧光染色将上述二抗换成荧光标记二抗(Alexa Fluor 488-conjugated Goat Anti-Rabbit)室温孵育2 h,DAPI 复染,其余同常规免疫组化。激光扫描共聚焦显微镜扫描采集图片,进行定位分析。
1.5 主要观察指标 ①大鼠滑膜水肿和关节积液情况;②血清和关节液炎症因子水平;③滑膜组织显微结构;④滑膜细胞超微结构;⑤滑膜水通道蛋白1、水通道蛋白3 蛋白的水平及分布。
1.6 统计学分析 用 SPSS 20.0 软件统计分析。计量资料以±s表示,正态性分布采用单因素方差分析,方差齐采用LSD检验,方差不齐采用Games-Howell 检验;非正态性分布采用非参数Kruskal-Wallis 检验,P< 0.05 为差异有显著性意义。
2 结果 Results
2.1 实验动物数量分析 实验选用大鼠24 只,分为3 组,实验过程中无脱失。
2.2 中药减轻滑膜水肿和关节积液 大鼠空白组关节液信号表达较弱,分布均匀;滑膜信号未显现。模型组关节液信号表达增强,表现为高信号,说明关节液增加;关节滑膜出现增生,可见髌上囊部位有黑色条状信号带,即为增生的滑膜信号;关节囊信号局部增强,说明关节出现肿胀现象。中药组关节液信号较弱;且无明显滑膜信号出现,说明中药能够减轻滑膜水肿和关节积液(图1)。
2.3 中药减轻血清和关节液炎症因子水平 与空白组相比,模型组血清和关节液中白细胞介素1β 水平明显增加(P<0.01),达到病变状态下炎症因子浓度。与模型组相比,中药组的血清和关节液中白细胞介素1β 水平均显著降低(P<0.01),说明中药能减少血清和关节液白细胞介素1β 水平。且中药组与空白组相比差异无显著性意义(P> 0.05),说明该药物能降低滑膜白细胞介素1β,趋近正常水平。
与空白组相比,模型组血清和关节液中肿瘤坏死因子α表达水平明显增加(P< 0.01),达到病变状态下炎症因子浓度。与模型组相比,中药组的血清和关节液中肿瘤坏死因子α 水平均显著降低(P< 0.01),说明中药能减少血清和关节液肿瘤坏死因子α 水平(表1)。
表1 |大鼠血清和关节液白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α 表达水平(±s,n=8)Table 1 |Expression levels of interleukin-1β and tumor necrosis factor α in rat serum and joint fluid表注:与空白组比较,aP< 0.01;与模型组比较,bP< 0.01指标 空白组 模型组 中药组肿瘤坏死因子α(nmol/L)血清 0.008 6 0.038 3a 0.009 8b关节液 0.051 2 0.141 4a 0.051 8b白细胞介素1β(μg/L) 血清 0.085 0 0.372 6a 0.103 2b关节液 0.237 9 1.441 9a 0.325 9ab
2.4 中药改善滑膜组织显微结构 滑膜组织石蜡切片苏木精-伊红染色显示,空白组的滑膜表面平整,衬里层由一两层滑膜细胞构成,排列较为规则,但细胞分布疏松、不连续;衬里下层由结缔组织构成,脂肪细胞丰富,血管较少。模型组的滑膜表面起伏不平整,局部区域乳头样增生,衬里层增生显著,滑膜细胞层数多达3 层以上,部分区域滑膜细胞增生至5-7 层及以上,细胞分布紊乱;滑膜衬里下层有淋巴细胞和单核细胞为主的大量炎症细胞浸润,脂肪细胞少见,纤维组织增生显著,血管广泛增生,局部毛细血管充血。中药组的滑膜表面较平整,衬里层基本接近正常厚度,多为一两层,滑膜细胞排列稀疏、不连续;衬里下层可见脂肪细胞大量分布,少量炎症细胞散在分布,纤维组织和血管增生不明显,但仍可见(图2)。滑膜组织病理评分显示[14-15],与空白组比较,模型组滑膜细胞增生、炎症细胞浸润、纤维组织增生和血管增生均明显增加(P< 0.01)。中药组与模型组比较,滑膜细胞增生、炎症细胞浸润、纤维组织增生和血管增生均明显降低(P< 0.01 或P< 0.05) (表2)。
文章来源:《中国实验方剂学杂志》 网址: http://www.zgsyfjxzzzz.cn/qikandaodu/2021/0304/486.html