期刊信息
主办:中国中医科学院中药研究所;中华中医药学会
主管:国家中医药管理局
ISSN:1005-9903
CN:11-3495/R
语言:中文
周期:半月
影响因子:1.817375
数据库收录:
北大核心期刊(2008版);北大核心期刊(2011版);北大核心期刊(2014版);北大核心期刊(2017版);化学文摘(网络版);中国科学引文数据库(2015-2016);中国科学引文数据库(2017-2018);中国科学引文数据库(2019-2020);日本科学技术振兴机构数据库;中国科技核心期刊;期刊分类:中药学
期刊热词:
药理
黑骨藤醇提取物调控急性痛风性关节炎模型大鼠(2)
【作者】网站采编
【关键词】
【摘要】1.4.4 给药治疗 造模后1 h 开始给药,秋水仙碱治疗组每天给予秋水仙碱9 mg/kg 灌胃,连续7 d;黑骨藤醇提取物高、中、低剂量治疗组分别给予100,50,20 mg
1.4.4 给药治疗 造模后1 h 开始给药,秋水仙碱治疗组每天给予秋水仙碱9 mg/kg 灌胃,连续7 d;黑骨藤醇提取物高、中、低剂量治疗组分别给予100,50,20 mg/kg 黑骨藤醇提取物灌胃,连续7 d;空白对照组和模型对照组给予等体积蒸馏水灌胃,连续7 d。以上各组大鼠均为每天上午9:00 灌胃,1 次/d。
1.5 主要观察指标
1.5.1 关节肿胀度 造模前1 h 及造模后1-7 d 观察关节肿胀度,每天灌胃前采用2 cm 试纸配合游标卡尺测量踝关节周长,并计算肿胀度,每个时间点测量3 次,取平均值。关节肿胀度(%)=(不同时间点关节周长-初始周长)/初始周长× 100%。
1.5.2 血清和滑膜组织中白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α、白细胞介素17 水平 在第7 天灌胃2 h 后于股动脉采血,血液在真空采血管中静置0.5 h,然后3 500 r/min 离心15 min,收集血清,-20 ℃保存。采血后处死大鼠,取大鼠造模踝关节以下0.5 cm 至以上2 cm 部分,将分离出的滑膜组织置于研钵中研碎,加入生理盐水,用组织匀浆器进行匀浆,直至匀浆液体呈现均匀一致的悬浊液,倒入EP 管中,3 000 r/min离心5 min,取上清液,-20 ℃保存。按照ELISA 试剂盒说明书要求检测血清和滑膜组织中肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素17 水平。对于同一指标,每一样本重复测量3 次,取平均值。
1.5.3 病理组织形态学观察 取滑膜组织,采用40 g/L 多聚甲醛固定,梯度乙醇脱水,二甲苯透明,石蜡包埋,切片厚度4 μm,置于干净载玻片上,60%恒温箱中孵育4 h,脱蜡后苏木精染色10 min,流水冲洗1 min,1%盐酸乙醇分化5 s,待颜色由蓝色变为红色后,蒸馏水冲洗6 min,用1%伊红染色5 s,乙醇脱水后采用二甲苯透明,晾干,封固,在显微镜下观察滑膜病理改变。
1.5.4 Western blot 检测滑膜组织中NF-κB、ERK1/2 和JNK 蛋白表达 取滑膜组织,放入干净研磨器于冰上操作,加入组织裂解液提取滑膜组织总蛋白,严格按BCA 蛋白定量试剂盒操作说明测定蛋白浓度,提取的蛋白与SDS 上样缓冲液混匀,煮沸变性10 min,经SDS-PAGE 凝胶电泳分离后转移蛋白至PVDF 膜上,5%脱脂奶粉室温孵育2 h,加入NF-κB、ERK1/2、JNK 和GAPDH 抗体,4 ℃孵育过夜,TBS-T 缓冲液洗膜10 min×5 次,加入HRP 标记的二抗工作液,37 ℃摇床孵育2 h,TBS-T 缓冲液洗膜10 min×5 次,采用ECL 法显色,凝胶成像系统拍照并分析,以NF-κB、ERK1/ ERK2、p-JNK/JNK 蛋白灰度值与GAPDH 蛋白灰度值的比值作为目的蛋白表达水平。对于同一指标,每一样本重复测量3 次,取平均值。
1.6 统计学分析 采用SPSS 17.0 软件进行统计学分析,计量资料以±s表示,踝关节肿胀度计量资料比较应用重复测量方差分析,其他指标计量资料比较用单因素方差分析,组间两两比较用LSD-t检验,P< 0.05 为差异有显著性意义。
2 结果 Results
2.1 实验动物数量分析 60 只SD 大鼠全部进入结果分析,中途无脱落。
2.2 各组大鼠不同时间点的踝关节肿胀度 注射尿酸钠后,模型对照组大鼠关节肿胀增加,于造模1 d 后达到高峰。治疗5 d 后,与模型对照组相比,秋水仙碱组(P< 0.01)和黑骨藤醇提取物高剂量组(P< 0.05)关节肿胀度明显降低。治疗7 d 后,与模型对照组相比,秋水仙碱组(P< 0.01)、黑骨藤醇提取物高剂量组(P< 0.01)、中剂量组(P< 0.05)、低剂量组(P< 0.05)关节肿胀度明显降低,且黑骨藤醇提取物高剂量组关节肿胀度明显低于低剂量组(P< 0.05),见表1。
2.3 各组大鼠血清、滑膜组织炎症因子水平 从表2,3 可以看出,秋水仙碱组、黑骨藤醇提取物高剂量组血清、滑膜组织白细胞介素1β、白细胞介素17、肿瘤坏死因子α 水平显著低于模型对照组(P< 0.01);黑骨藤醇提取物中剂量组、低剂量组与模型对照组相比也均有显著性差异(P< 0.05),秋水仙碱组、黑骨藤醇提取物高剂量组也显著低于黑骨藤醇提取物低剂量组(P< 0.05),说明黑骨藤醇提取物各个剂量组均能不同程度地降低血清、滑膜组织中白细胞介素1β、白细胞介素17、肿瘤坏死因子α 水平,且呈剂量依赖关系。
2.4 各组大鼠滑膜组织病理形态改变 空白对照组滑膜组织结构清晰,滑膜细胞排列规则,其间为胶原性间质,未见炎性细胞浸润;模型对照组滑膜组织具有明显炎症,可见炎性细胞浸润,滑膜细胞增生,有纤维炎性蛋白渗出物;秋水仙碱组、黑骨藤醇提取物高、中、低剂量组滑膜细胞增生及炎性细胞浸润均有不同程度减轻,其中秋水仙碱组、黑骨藤醇提取物高剂量组相差不大,见图1。
2.5 各组滑膜组织NF-κB、ERK1/2 和JNK 蛋白表达水平 与空白对照组比较,模型对照组NF-κB、ERK1/2 和p-JNK 蛋白表达水平明显升高(P< 0.01);与模型对照组比较,秋水仙碱组、黑骨藤醇提取物高、中、低剂量组NF-κB、ERK1/2 和p-JNK蛋白表达水平明显降低(P< 0.05 或P< 0.01),且黑骨藤醇提取物具有剂量依赖性(P< 0.05),见图2。
文章来源:《中国实验方剂学杂志》 网址: http://www.zgsyfjxzzzz.cn/qikandaodu/2021/0302/483.html