期刊信息
主办:中国中医科学院中药研究所;中华中医药学会
主管:国家中医药管理局
ISSN:1005-9903
CN:11-3495/R
语言:中文
周期:半月
影响因子:1.817375
数据库收录:
北大核心期刊(2008版);北大核心期刊(2011版);北大核心期刊(2014版);北大核心期刊(2017版);化学文摘(网络版);中国科学引文数据库(2015-2016);中国科学引文数据库(2017-2018);中国科学引文数据库(2019-2020);日本科学技术振兴机构数据库;中国科技核心期刊;期刊分类:中药学
期刊热词:
药理
体外培养大鼠关节软骨细胞原代至第代的形态学(4)
【作者】网站采编
【关键词】
【摘要】由于关节软骨内无神经、血管分布,所以软骨组织在损伤后自我修复能力极差[28],这就使医学干涉辅助其修复变的十分必要,而此类实验的基础便是在体
由于关节软骨内无神经、血管分布,所以软骨组织在损伤后自我修复能力极差[28],这就使医学干涉辅助其修复变的十分必要,而此类实验的基础便是在体外获得可靠的软骨细胞进行研究。由于序贯酶消化法操作复杂且可能会增加软骨细胞活性受损的概率[4,29],因此可能无法达到理想的实验效果。现有研究与文献证明:相较于序贯酶消化法,一步酶消化法(单纯Ⅱ型胶原蛋白酶)可以最大限度简化操作步骤,缩短操作时间,减少软骨细胞接触消化酶的时间和种类,降低酶本身损伤软骨细胞的概率,使所得软骨细胞具有较好的生物活性[4,17-18,29-30]。因此,实验采用一步酶(单纯使用Ⅱ型胶原蛋白酶)消化法分离软骨细胞,经显微镜观察发现所获得细胞形态良好,增殖实验进一步验证其增殖能力佳,并且通过Ⅱ型胶原和蛋白聚糖免疫荧光与甲苯胺蓝染色对其进行定性和状态评价[31],确定所培养细胞具有较好的生物活性,进一步证明了上述软骨细胞分离、培养技术的可靠性[21,23],为未来的体内、外实验打下了可靠的基础。
CCK-8检测法绘制第1-5代软骨细胞生长曲线的结果表明:在1-5代细胞中,第3代细胞增殖率在同一时间点略高于其他代细胞,并且对数期细胞活性更强。现有文献证明:传代3代以内软骨细胞具有良好的生长态势、稳定的生物学特征,传代4次后出现“去分化”现象[30,32-33],因此课题组采用第3代软骨细胞进行后续实验研究。实验采用Ⅱ型胶原酶一步消化法成功从标本中分离出大鼠软骨细胞并传代培养进行检测,也提示3代软骨细胞是用于实验研究的可靠选择。
文章通过Ⅱ型胶原和蛋白聚糖免疫荧光与甲苯胺蓝染色组织学检测,结合细胞增殖实验联合对Ⅱ型胶原酶一步消化法所分离出的软骨细胞进行定性,并验证其具有优秀的增殖能力,这便为进一步的实验研究提供了可靠的种子细胞,使将其与生物支架材料联合培养为复合体植入机体治疗全层软骨缺损成为可能,是系列实验最重要的基础条件。
作者贡献:实验设计为赵德伟、覃开蓉,实验实施为杨帆、刘家河、杨佳慧,实验评估为刘保一,资料收集与撰写文章为杨帆。
经费支持:该文章接受了“国家自然科学基金委项目(,)”“国家重点研发计划(2016YFC)”“大连市科技创新基金项目(2018J11CY030)”的资助。所有作者声明,经费支持没有影响文章观点和对研究数据客观结果的统计分析及其报道。
利益冲突:文章的全部作者声明,在课题研究和文章撰写过程中不存在利益冲突。
机构伦理问题:实验经大连大学附属中山医院伦理委员会批准。实验过程遵循了国际兽医学编辑协会《关于动物伦理与福利的作者指南共识》和本地及国家法规。实验动物在麻醉下进行所有的手术,并尽一切努力最大限度地减少其疼痛、痛苦和死亡。
文章查重:文章出版前已经过专业反剽窃文献检测系统进行3次查重。
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文章来源:《中国实验方剂学杂志》 网址: http://www.zgsyfjxzzzz.cn/qikandaodu/2021/0316/523.html