期刊信息
主办:中国中医科学院中药研究所;中华中医药学会
主管:国家中医药管理局
ISSN:1005-9903
CN:11-3495/R
语言:中文
周期:半月
影响因子:1.817375
数据库收录:
北大核心期刊(2008版);北大核心期刊(2011版);北大核心期刊(2014版);北大核心期刊(2017版);化学文摘(网络版);中国科学引文数据库(2015-2016);中国科学引文数据库(2017-2018);中国科学引文数据库(2019-2020);日本科学技术振兴机构数据库;中国科技核心期刊;期刊分类:中药学
期刊热词:
药理
体外培养大鼠关节软骨细胞原代至第代的形态学(3)
【作者】网站采编
【关键词】
【摘要】图 1|倒置相差显微镜下观察软骨细胞形态(×100)Figure 1 |Morphology of chondrocytes under inverted phase contrast microscope (×100)图注:图A细胞处于游离期,细胞质回缩
图 1|倒置相差显微镜下观察软骨细胞形态(×100)Figure 1 |Morphology of chondrocytes under inverted phase contrast microscope (×100)图注:图A细胞处于游离期,细胞质回缩致使整个胞体呈圆球形;B为细胞12 h后开始附壁,部分细胞外形由圆形转变为多边形和椭圆形;C为24 h后细胞呈散在三角形、多角形贴附于培养皿底;D为细胞第5天出现复层生长趋势,细胞聚集处生长状态良好;E,F分别为第2,3代细胞,形态均较佳,细胞较原代大小稍有增加,梭形细胞数量也逐渐增多
图 2| 第1-5代软骨细胞生长曲线Figure 2 |The growth curves of chondrocytes at passages 1-5图注:第3代细胞增殖率在同一时间点略高于其他代细胞,并且对数期细胞活性更强
(2)免疫荧光染色:可见第3代软骨细胞Ⅱ型胶原(见图3C)和蛋白聚糖(见图3D)表达,细胞浆及胞膜均出现清晰绿色荧光,细胞核经DAPI试剂复染后,荧光下可见细胞核清晰蓝紫色荧光,可确定细胞核及细胞位置和大致形态,综上表明培养的第3代细胞表达特征性Ⅱ型胶原和蛋白聚糖,并主要分布于胞浆和细胞膜上,这些也都是软骨细胞的特征。
3 讨论 Discussion
图 3|第3代软骨细胞甲苯胺蓝和免疫荧光化学检测Figure 3 |Toluidine blue staining and immunofluorescence assay of passage 3 chondrocytes图注:图A(×40)、B(×200)为甲苯胺蓝染色,可见细胞为长梭形呈放射状排布并铺满瓶底,所染细胞核呈圆形形态规整,胞浆着色稍浅呈浅蓝色,其内可见少量蓝紫色异染颗粒;C,D为免疫荧光染色(×200):可见软骨细胞Ⅱ型胶原(C)和蛋白聚糖(D)表达,细胞浆及胞膜均出现清晰绿色荧光,细胞核经DAPI试剂复染后,荧光下可见细胞核清晰蓝紫色荧光,可确定细胞核及细胞位置和大致形态
细胞培养是指在生物体外模拟体内环境(无菌、温度、酸碱度和营养条件等),使分离出的细胞在其中生存、生长、繁殖并维持其主要结构和功能的技术。其方法是在生物体上直接取出单个细胞或获取部分组织消化成单个细胞,并在体外适宜条件下加以培养,使细胞能继续存活与增殖。从1885年德国学者ROUX使用生理盐水对鸡胚组织进行培养开始算起,细胞培养技术发展到今天已有130多年的历史。经过几代研究者的不懈努力,这100多年中细胞培养技术得到了长足的发展。特别是从1960年至今,随着培养器皿、培养基与培养方法取得的突破性进展,细胞培养技术进入鼎盛阶段。由于其能在体外提供单纯的细胞进行独立模拟体内操作,使生物实验从宏观发展到微观,而又拥有操作简单、费用低廉等优点,近百年来细胞培养技术在基础研究和应用领域中的使用也越来越广泛。当今,细胞培养技术在生命医学研究、疾病机制探讨、药物筛选研制及生物制品生产等多个领域的基础中发挥着不可替代的作用。特别在退化性疾病研究和肿瘤机制方向[19-20],可以通过细胞体外培养、人工干涉,来揭示其发生、发展过程中分子调控的行为和机制。在药物研制方向,细胞培养的作用更是举足轻重,使外源性化学药物可以直接作用于靶细胞,特别是在药物的初筛阶段,由于所需数据量特别巨大,动物体内实验不现实,细胞培养技术就可以根据实验目的来设计完整的实验流程,短期内便可以获得包括药物反应和细胞毒性在内的各种实验数据。同时,经典标准化细胞培养流程的定制,使得自动化设备培养成为可能,这也使培养效率显著提高[21]。而在生物制品方面,很多疫苗的生产方式为细胞发酵,所以细胞培养也使该领域最主要的生产方式之一[22-23]。
在生物体内关节软骨主要分为透明软骨、弹性软骨和纤维软骨3种,软骨细胞被包裹在软骨陷窝中,间隙之间由细胞基质填充,软骨细胞外基质由胶原蛋白和蛋白聚糖组成,而胶原蛋白主要是Ⅱ型胶原蛋白[24-25]。培养软骨细胞需将其完全游离出来,这就需要充分的溶解软骨细胞外基质,也就是说使用酶类将细胞外基质消化之后方可获得高纯度软骨细胞。查阅国内外文献资料,目前应用较多的为单纯胶原酶消化法[23,26-27]。此次实验通过Ⅱ型胶原酶消化细胞外基质,获得的细胞形态、增殖能力都令人满意。第3天细胞即进入指数生长期,且Ⅱ型胶原酶消化未出现如胰酶消化时,所导致的细胞损伤,降低细胞存活率的情况。正因为应用胰酶消化关节软骨细胞弊大于利,且胰蛋白酶在关节软骨细胞消化过程中所起到的其他作用尚待进一步研究,故Ⅱ型胶原酶在软骨细胞体外分离消化中相对于胰酶是更为有效、安全。
文章来源:《中国实验方剂学杂志》 网址: http://www.zgsyfjxzzzz.cn/qikandaodu/2021/0316/523.html