期刊信息
主办:中国中医科学院中药研究所;中华中医药学会
主管:国家中医药管理局
ISSN:1005-9903
CN:11-3495/R
语言:中文
周期:半月
影响因子:1.817375
数据库收录:
北大核心期刊(2008版);北大核心期刊(2011版);北大核心期刊(2014版);北大核心期刊(2017版);化学文摘(网络版);中国科学引文数据库(2015-2016);中国科学引文数据库(2017-2018);中国科学引文数据库(2019-2020);日本科学技术振兴机构数据库;中国科技核心期刊;期刊分类:中药学
期刊热词:
药理
8 周有氧运动改善肥胖诱导心肌纤维化过程中核(2)
【作者】网站采编
【关键词】
【摘要】1.4.2 取材 所有动物在最后一次运动后48 h 取材。采用腹腔注射5%水合氯醛(10 mL/kg)麻醉,打开胸腔迅速取出心脏,将心脏放在4 ℃生理盐水中洗去浮血,称质
1.4.2 取材 所有动物在最后一次运动后48 h 取材。采用腹腔注射5%水合氯醛(10 mL/kg)麻醉,打开胸腔迅速取出心脏,将心脏放在4 ℃生理盐水中洗去浮血,称质量,计算全心质量指数(全心质量/体质量)。
1.4.3 天狼猩红染色 取左心室(除心尖外),40 g/L 多聚甲醛固定,石蜡包埋后纵切组织,切片厚6 μm;烤片2 h,取切片,脱蜡;天狼猩红染色液滴染1 h,置于无水乙醇中迅速分化数秒钟,洗去表面浮色;Mayer 苏木精染色液染细胞核8-10 min,使细胞核染成蓝色,自来水洗去浮色10 min;常规脱水透明;中性树胶封固。天狼猩红染色法可使胶原纤维呈红色,偏振光下Ⅰ型胶原呈红色或黄色,Ⅲ型胶原呈绿色。将制好的切片放在光镜下观察,随机分析5 个视野,取其均值,测算心肌胶原容积分数(心肌胶原面积与心肌总面积的比值),用偏振光显微镜观察Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维表达。
1.4.4 丙二醛水平检测 各组大鼠心脏取材后,迅速置于液氮速冻,在液氮中研磨粉碎,加入裂解液,4 ℃ 12 000×g高速离心提取蛋白,BCA 法测定蛋白浓度。按照丙二醛试剂盒说明加入相应工作液,用酶标仪在532 nm 测定吸光度,对照标准曲线计算组织丙二醛水平。
1.4.5 Western blot 方法检测相关蛋白表达 各组大鼠心脏取材后,置于液氮中迅速冷却,在液氮中研磨粉碎,加入相应比例RIPA 裂解液和蛋白酶抑制剂,静置30 min,4 ℃ 12 000 r/min 离心15 min,取上清液,BCA 法测定蛋白浓度,调整蛋白浓度为20 g/L,采用 SDS-PAGE 电泳对各分子里样品蛋白进行分离,然后转膜至PVDF 膜,5%BSA 孵育封闭1 h,然后分别加入Ⅰ型胶原蛋白(1 ∶200)、Ⅲ型胶原蛋白(1 ∶200)、基质金属蛋白酶2(1 ∶200)、基质金属蛋白酶组织抑制剂2(1 ∶200)、Nrf2(1 ∶100)、超氧化物歧化酶(1 ∶500)、血红素加氧酶1(1 ∶200)、醌氧化还原酶1(1 ∶200)不同抗体,4 ℃孵育过夜,第2 天加入相应二抗孵育1 h,TBST 漂洗3 次,每次10 min,配制ECL 发光试剂反应液,放入Bio-Rad 凝胶成像仪中进行拍摄得到目的条带图像。用 Image Lab 软件读取条带的积分灰度值,以β-actin 为内参,各组目的蛋白的表达=(实验组目的蛋白灰度值/内参蛋白灰度值)∶(对照组目的蛋白灰度值/内参蛋白灰度值)。
1.5 主要观察指标 ①运动训练后各组大鼠心脏质量与全心指数;②运动训练后各组大鼠心肌胶原容积分数;③各组大鼠心肌组织丙二醛水平;④各组大鼠心肌组织Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白、基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶组织抑制剂2、Nrf2、超氧化物歧化酶、血红素加氧酶1 和醌氧化还原酶1 蛋白表达。
1.6 统计学分析 应用 SPSS 19. 0 对实验数据进行分析,实验结果以平均值±标准误形式表示,组间采用单因素方差分析法( ANOVA),P< 0.05 为差异有显著性意义,P< 0.01 为差异有非常显著性意义。
2 结果 Results
2.1 实验动物数量分析 实验开始采用60 只SD 大鼠用于构建模型,筛选得到20 只肥胖大鼠,有20 只未达到肥胖标准被舍去,最终共有40 只大鼠进入结果分析,中途无脱落。
2.2 各组大鼠体质量和全心指数 如表1 所示,正常运动组体质量、心脏质量和全心指数与正常安静组相比无差异;肥胖安静组大鼠体质量和心脏质量均非常显著高于正常安静组,但是全心指数与正常安静组并未呈现显著性增加;肥胖运动组大鼠体质量和心脏质量均显著低于肥胖安静组,而全心指数与肥胖安静组差异无显著性意义。
表1 |各组大鼠体质量、心脏质量和全心指数 (±s,n=10)Table 1 |Body mass, heart mass and heart mass index of rats in each group表注:与正常安静组相比,aP< 0.01;与肥胖安静组相比,bP< 0.05,cP< 0.01组别 体质量(g) 心脏质量(g) 全心指数(g/kg)正常安静组 474. 1. 2.正常运动组 470. 1. 2.肥胖安静组 579. 1. 2.肥胖运动组 546. 1. 2.
2.3 大鼠心肌胶原容积分数 如表2 所示,肥胖安静组大鼠心肌胶原容积分数非常显著高于正常安静组,肥胖运动组较肥胖安静组非常显著降低。如图1、图2 和表3 所示,肥胖安静组Ⅰ型胶原纤维表达和Ⅰ型胶原蛋白表达显著高于正常安静组,而肥胖运动组Ⅰ型胶原纤维表达和Ⅰ型胶原蛋白表达显著低于肥胖安静组。
2.4 各组大鼠心肌组织基质金属蛋白酶2 和基质金属蛋白酶组织抑制剂2 蛋白表达 如图3 和表4 所示,各组大鼠心肌组织基质金属蛋白酶组织抑制剂2 表达并未呈现出显著性差异;与正常安静组相比,正常运动组基质金属蛋白酶2 表达无显著性变化;肥胖安静组基质金属蛋白酶2 表达和基质金属蛋白酶2/基质金属蛋白酶组织抑制剂2 比值较正常安静组均显著增加;而肥胖运动组基质金属蛋白酶2 表达和基质金属蛋白酶2/基质金属蛋白酶组织抑制剂2 比值均显著降低。
文章来源:《中国实验方剂学杂志》 网址: http://www.zgsyfjxzzzz.cn/qikandaodu/2021/0128/403.html